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細(xì)胞因子試劑盒在科研方面的應(yīng)用
2022-02-20 瀏覽次數(shù)：1349
細(xì)胞因子試劑盒從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評(píng)價(jià)。靈敏度有二層含義，為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力；為試劑對(duì)大量樣品中陽(yáng)性檢出的能力。特異性常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測(cè)物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測(cè)定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽(yáng)性，所以交叉反應(yīng)是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。精密度一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線(xiàn)性范圍。準(zhǔn)確度：通過(guò)添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
細(xì)胞因子試劑盒主要用于科研方面，不用于臨床診斷，可以用于檢測(cè)各種指標(biāo)。做快速檢測(cè)時(shí)，待檢測(cè)的樣品數(shù)越多，出現(xiàn)加錯(cuò)的概率也就越大，特別容易出錯(cuò)的是在酶聯(lián)偶合物（conjugate）與樣品液或標(biāo)液混合的階段，因?yàn)檫@時(shí)使用的是單道槍。其實(shí)解決的方法比較簡(jiǎn)單，我們只要把操作上的順序加以調(diào)換，即先把待測(cè)液或標(biāo)液加入稀釋孔中，再加入酶聯(lián)偶合物就不會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤了。而且這兩個(gè)順序交還對(duì)結(jié)果也沒(méi)有影響，因?yàn)檫@一步的主要目的是讓兩種液體充分混合。
細(xì)胞因子試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，用抗肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)抗體與結(jié)合在包被抗體上的人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)濃度與OD450值之間呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品中細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的濃度。
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