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怎么選擇流式抗體？
2018-05-03 瀏覽次數(shù)：2325
我們開始流式實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要選擇抗體，必然要涉及到熒光的選擇，盡量使這些熒光的補(bǔ)償值降到zui低。
1，我們需要了解我們用的流式細(xì)胞儀的硬件設(shè)施（激光，濾光片）
2，選擇合適的熒光染料，盡量利用到你的儀器上的所有激光，這樣可以使這些熒光交叉可能性達(dá)到zui小。一般四種顏色或以下的比較好選，常用：FITC,PE,APC,Percp-cy5.5。界面有點(diǎn)不同，但基本原理就是設(shè)置好你需要集中顏色，用的是哪臺(tái)儀器，幾根激光。。。軟件就會(huì)自動(dòng)列出合適的染料。
3，選擇好熒光染料以后，就是將這些染料與你的抗體起來，這就要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)的需要了，有些常用的抗體上可能標(biāo)記有很多種染料，但有些不常用的選擇性就不太多，所以可以先定一些無法選擇的抗體，然后就是根據(jù)表達(dá)量少的標(biāo)記熒光信號(hào)強(qiáng)的染料，認(rèn)為重要的抗體標(biāo)記熒光信號(hào)強(qiáng)的，常用熒光的強(qiáng)弱如下：PE>APC>PE-CY7>Percy-cy5.5>FITC>APC-CY7。
4，抗體確定好后，就可以開始預(yù)實(shí)驗(yàn)了：包括樣品的處理，抗體的濃度，時(shí)間，這些都需要一定的try。
5，正式開始實(shí)驗(yàn)需要做blank/isotype,單染（兩兩調(diào)補(bǔ)償），復(fù)染（sample）。
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